Заместитель директора по эпидемиологической и экологической безопасности Национального института общественного здравоохранения - Национального института гигиены отметил в интервью ПАП, что в диагностике результаты тестов во многом зависят от материала, собранного для анализа. На данный момент у пациентов с подозрением на коронавирусную инфекцию берут анализы и проводят молекулярный тест. Лаборатория предоставляет первые результаты в течение 24-48 часов, если наличие вируса не обнаружено, берется еще один образец и анализ повторяется.
ПАП: Какой диагноз у пациентов с подозрением на коронавирусную инфекцию? Что такое тест? Какой материал анализируется в лаборатории?
Рафал Герчиньски: Тестовый материал адекватен клиническому состоянию пациента, и его тип влияет на получаемые аналитические результаты. Поэтому у людей, не имеющих симптомов заболевания, материал, который мы чаще всего получаем, — это мазок из носоглотки. Однако следует отметить, что в таком материале может быть трудно обнаружить вирус, поскольку в верхних дыхательных путях имеется богатая флора микроорганизмов. Однако определенным материалом для исследования является материал, собранный из нижних дыхательных путей, так называемых бронхоспират и бронхиально-альвеолярный лаваж (БАЛ). Однако такой материал собирают у людей в тяжелом клиническом состоянии.
ПАП: Значит, не у пациентов, которые вернулись из Уханя в воскресенье и были отправлены в больницу во Вроцлаве для наблюдения? Были ли у них какие-либо тревожные симптомы?
Р.Г.: В исследованиях, которыми мы сейчас занимаемся, материал брали из мазка из носоглотки, потому что, как я уже говорил, это был случай, когда состояние испытуемых не указывало на какое-либо заболевание.
ПАП: А как выглядит поэтапная диагностика?
Р.Г.: Что касается технической сути испытания, мы получаем образец с описанием. К нам его присылают медицинским транспортом из инфекционного отделения. Это плотно закрывающиеся многослойные коробки. Также подчеркну, что в лаборатории мы проводим только анализы по заказу Госсанэпиднадзора. Сразу отмечу, что мы не принимаем анализы от частных лиц, клиник и больниц без предварительного согласования СЭС. Исключение составляют пациенты инфекционных больниц и инфекционных отделений. Возвращаясь к основной теме, хотелось бы добавить, что потом образец попадает в лабораторию с обеспечением третьей степени герметичности (BSL-3), которая есть у нас в институте. Здесь работают три человека – оператор, помощник оператора и наблюдатель. Они защищены так, как если бы они работали с чумой, вирусом Эбола, сибирской язвой. Это наша стандартная процедура. После вскрытия образцов начинается процедура выделения нуклеиновой кислоты вируса, в данном случае РНК. В самом начале вирус инактивируется, т.е. мы добавляем реагенты, которые физически уничтожают сам вирус, но оставляют его нуклеиновую кислоту. На данный момент вирус не является законченным и уже не заразен. Дальнейшие этапы испытаний уже проходят в лаборатории BSL-2 с повышенными мерами индивидуальной защиты. Это трудоемкий процесс.
ПАП: Сколько времени занимает такой процесс с момента распаковки материала и выделения РНК?
Р.Г.: Среднее время работы в лаборатории BSL-3 составляет три часа из-за тяжелых условий труда. В помещении постоянно поддерживается отрицательное давление, воздух часто обменивается и очищается НЕРА-фильтрами, из-за чего пересыхает кожа и пересыхает горло, а из-за защитных костюмов, очков и респираторов становится жарко. , кожа быстро потеет и сохнет, что вызывает быструю потерю жидкости и чувство жажды. Люди, работающие в таких условиях, быстро сильно утомляются. Поэтому на БСЛ-3 допускается не более трех часов, и максимум четыре часа работают только очень опытные сотрудники с образцовым психофизическим состоянием и стрессоустойчивостью, возникающие в результате осознания того, что они держат в руках очень опасный биологический материал. К вышеупомянутым трем часам необходимо добавить 40 минут. одеваться перед входом и порядок снятия костюмов при выходе из BSL-3.
ПАП: Затем, как вы уже упомянули, он отправляется в лабораторию BSL-2.
Р.Г.: Да. Туда же поступает выделенная нуклеиновая кислота вируса. Дальнейшая изоляция проводится в этой лаборатории. Затем выделенный материал отправляют на молекулярное тестирование. В настоящее время мы используем два разных метода. Первый представляет собой реакцию ПЦР с использованием обратной транскриптазы, второй метод тот же, но использует термоциклеры, считывающие результат в реальном времени, так называемый ПЦР в реальном времени с использованием специального ДНК-зонда. Каждый из этих методов имеет свои преимущества и нацелен на разные участки генома вируса. Метод реального времени дает результат быстро и очень чувствителен, т. е. мы можем обнаружить небольшое количество вируса, но существует и риск ложноположительных результатов – именно из-за такой высокой чувствительности.
ПАП: Зачем повторять тест?
Р.Г.: Мы знаем, что самый длительный инкубационный период, наблюдаемый у больного, составляет 14 дней. По этой причине необходимо периодически тестировать людей, у которых нет симптомов, но мы знаем, что они могли заразиться, потому что находились в месте, где циркулирует вирус. Поэтому мы собираем последующие образцы через определенные промежутки времени, чтобы проверить, достиг ли иногда вирус уровня обнаружения у этого человека. Однако решение о дальнейших обследованиях принимает врач. Правда в том, что, поскольку мы знаем, что инкубационный период составляет до 14 дней, и если у пациента в течение этого времени нет никаких симптомов, мы предполагаем, что он не инфицирован. Однако на данном этапе мы находимся, отслеживаем всех, кто оказался в опасной зоне.
ПАП: Что мы уже знаем об уханьском вирусе? Как он построен?
Р.Г.: Их около 30 тысяч. пары оснований, т.е. единицы генетического кода, из которых построена РНК, т.е. буквы А, U, G, C, известные нам из уроков биологии. Вирус имеет 12 потенциальных единиц трансляции, структурных и неструктурных генов. В нашем исследовании мы нацелены на один из наиболее стабильных участков этого вируса, а именно на ген нуклеокапсида (N) и ген оболочки (E). Благодаря достижениям науки теперь мы можем быстро секвенировать нуклеиновые кислоты, то есть определять полную генетическую информацию вируса, даже без предварительного выделения вируса. Упрощая, можно сказать, что мы можем сделать все эти 30 000. определите буквы, прежде чем мы сможем вырастить вирус. Австралийцам и итальянцам уже удалось изолировать вирус, то есть размножить его в клеточной линии вне человеческого организма.
Что касается характеристик самого уханьского вируса, то это бета-коронавирус линии развития B, к которому также относится вирус атипичной пневмонии, вызвавший несколько лет назад серьёзную эпидемию и ставшую причиной смерти почти 800 человек. Уханьский вирус имеет схожую структуру. В настоящее время ученые полагают, что это может быть производное варианта вируса атипичной пневмонии, обнаруженного у летучих мышей, хотя это все еще находится на начальной стадии исследований.
ПАП: Можно сказать, что мы уже многое знаем об этом вирусе, учитывая тот факт, что первый подтвержденный случай заболевания был в начале декабря 2019 года.
Р.Г.: Учитывая, что с момента первого заболевания прошло всего два месяца, следует признать, что скорость распространения вируса, а также прогресс знаний о его эпидемиологии и технологии обнаружения очень высоки. Я думаю, что как мировое сообщество мы готовы иметь возможность быстро выявлять инфицированных людей и ограничивать распространение болезни, а затем разработать вакцину или найти лекарство.
ПАП: Как бороться с вирусом?
Р.Г.: На данный момент самое большое оружие — это изоляция больных людей и предотвращение физического распространения вируса.
Интервью Клаудии Торчалы (PAP)
Автор: Клаудия Торчала
тор /крап/
